糖蛋白广泛分布于生命系统的多个层面，参与细胞识别、信号转导、免疫调节等关键过程。其结构复杂性主要体现在糖链的多样性和修饰位点的分布，这一特点也使得糖蛋白的结构研究具有相当高的挑战性。在结构表征方法中，圆二色性（Circular Dichroism, CD）光谱因其快速、非破坏性和操作简便的特点，被广泛用于蛋白质的二级结构分析。

CD光谱简述

CD光谱是基于手性分子对左右圆偏振光吸收差异的光谱技术。在蛋白研究中，远紫外区CD（190–250nm）主要反映蛋白主链二级结构构象，例如α-螺旋和β-折叠。相比X射线晶体学、冷冻电镜等高分辨率手段，CD具有实验周期短、样品需求少、分析环境接近天然状态等优势，适用于快速评估构象变化与热稳定性。然而，CD光谱本质上反映的是整分子平均结构信息，信号受到构象异质性、溶液条件等因素影响较大，且不能提供原子级或结构域级别的解析。

适用性一：糖链不直接产生干扰信号，主链构象仍可监测

糖链本身并不在CD信号响应区（尤其是远紫外区）产生显著吸收，因此在理论上并不会直接遮蔽蛋白主链的CD信号。这意味着，即使存在糖基化修饰，CD依然可以反映出蛋白质骨架的主要二级结构组成。特别是当糖链修饰程度较低、分布较为分散，或位于结构表面不影响折叠核心时，CD所得光谱与非糖基化蛋白类似，分析结果可供研究者参考。在实际研究中，CD常被用于评估糖基化是否显著改变蛋白主链的折叠状态，从而判断修饰对构象稳定性是否具有调节作用。这类用途突出CD在趋势判断中的功能价值。

适用性二：结构快速筛查、构象对比场景中具实用价值

CD技术由于灵敏度高、响应快、对样品浓度要求低，非常适合用于以下糖蛋白研究情境：

• 对比不同表达体系产物的整体构象差异；
• 评估糖基化对蛋白热稳定性的影响；
• 初步判断糖蛋白是否处于天然折叠状态；
• 在突变或修饰前后监测构象变化趋势。

这些应用均不依赖原子级信息，而更注重结构轮廓变化，因此CD可以作为初筛工具，为后续高分辨率结构研究提供参考依据。

局限性一：糖链引起背景吸收，信噪比下降

尽管糖链不直接产生强CD信号，但其在短波长区域可能引发背景吸收，尤其是在含有多个糖基位点或大分子量聚糖修饰时。这种背景干扰可能导致190–200nm波段信号质量下降，影响数据稳定性和可靠性。此外，CD信号强度对样品浓度和光程高度敏感，当糖链数量较多时，为避免吸收过强而降低样品浓度，可能进一步削弱可检测的主链信号，限制分析结果的分辨率。

局限性二：构象柔性增加，信号平均效应增强

糖链具有高度柔性，常处于多个构象之间动态转换，这种结构异质性在CD光谱中表现为信号模糊或特征峰不明显。当糖链占分子质量较大比例或修饰密度较高时，整个蛋白的构象一致性降低，CD光谱反映的是一个平均化的、动态的结构轮廓，较难解析出具体的二级结构比例。这种平均效应尤其影响CD拟合算法对α-螺旋和β-折叠等结构类型的定量评估，导致分析结果偏离真实构象状态。

局限性三：空间分辨率低，无法定位结构变化来源

CD光谱提供的是整体结构特征的“投影”，无法对不同结构域、修饰位点或糖链本身的构象变化进行区分。例如，如果CD光谱显示某一构象变化，无法明确这一变化是源于糖链的添加、核心结构域的不稳定，还是溶液条件的改变。因此，当研究目标涉及特定位点的构象动态，或者需分析糖链与蛋白主链之间的局部构象耦合关系时，CD无法胜任此类精细化解析任务。

适用与局限的平衡：如何合理使用CD技术？

CD在糖蛋白研究中既有其可操作空间，也存在清晰的应用边界：

• 适用的，是整体结构趋势分析：如主链构象是否改变、热稳定性是否下降、不同表达产物是否一致。
• 局限的，是细节解析和修饰定位问题：如糖链对局部结构影响、糖链自身构象、不同修饰位点对结构的独立贡献。

CD应被视为一种支持性工具，适合早期筛查或辅助判断，而非用于替代高分辨率结构方法。在多技术联用的策略中，CD可以与质谱、冷冻电镜、NMR等手段形成有效互补，提升整体结构研究效率。

圆二色性光谱作为经典的构象分析工具，在糖蛋白研究中仍有可用价值，尤其在对趋势、差异、稳定性等维度进行评估时能够发挥有效作用。但必须明确，其分析深度和精度有限，不能独立完成复杂结构问题的解析任务。如您正面临糖蛋白结构表征、构象分析或方法选择的技术难题，欢迎联系百泰派克生物科技，获取专业建议与定制化解决方案，助力科研进展更进一步。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

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