石蜡切片免疫组化染色常见问题！
内源性生物素：生物素是一种维生素，作为一种辅酶参与羧化反应。在人体组织中，绝大多数生物素与线粒体丙酮酸盐羧化酶相关，因此，富含线粒体的细胞具有丰富的内源性生物素，如肾脏、肝脏以及一些肿瘤细胞。如果应用生物素/卵白素检测系统，由于卵白素可以和生物素不可逆地强结合，势必会造成非特异性染色，热介导的抗原修复可以显著“复活”内源性生物素，所以更加加剧这种非特异背景染色。远慕生物指出 ：解决的方法除了换成非生物素的检测系统外，还可以用以下简单的方法封闭内源性生物素。
首先用蛋清中的卵白素（一个鸡蛋清加入到100ml的PBS中）封闭内源性生物素，再用5%奶粉作为生物素替代品（5克奶粉加入100ml的PBS/TBS中）来封闭卵白素中未结合的位点，冲洗后即可加一抗。内源性过氧化物酶天酒地一般红细胞和嗜中性粒细胞中过氧化物酶含量比较高，会造成非特异性染色。
灭活内源性过氧化物酶的方法：0.3%-3%H2O2，用PBS（pH7.4）或蒸馏水或甲醇配制。冲洗步骤免疫组化染色步骤中包括多次冲洗过程，任何一步出现冲洗不干净的问题，都有可能产生背景染色。解决的方法可以在冲洗液中加入吐温20，一般在1000ml的冲洗液中加入0.2ml的吐温20即可。鼠单抗用于鼠组织由于小鼠组织中可能含有内源性IgG，所以检测系统就会识别这些抗体，造成非特异性染色。
解决的方法要么封闭内源性IgG，要么直接使用商品化的Mouse-to-Mouse检测试剂盒。固定不及时 可以造成蛋白弥散，会产生异位染色。干片孵育的过程中没有放入湿盒或加入液体过少或孵育时间过长，都会造成局部（尤其是边缘）干片，应该避免。修复过度抗原热修复（尤其是使用EDTA）有时会造成细胞核异位染色，对于细胞核染色的抗体这种情况应通过对照片加以甄别