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大鼠儿茶酚抑素（CST）定量检测试剂盒（ELISA）

作者：上海卡努生物科技有限公司 2011-11-07T00:00 (访问量:1752)

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。

大鼠儿茶酚抑素（CST）定量检测试剂盒（ELISA）

使用说明书

【试剂盒名称】

大鼠儿茶酚抑素（CST）定量检测试剂盒（ELISA）

【试剂盒用途】

定量检测大鼠血清、血浆及相关液体样本中儿茶酚抑素（CST）的含量。

【检测原理】

本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被大鼠儿茶酚抑素（CST）抗体的透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中大鼠儿茶酚抑素（CST）浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中大鼠儿茶酚抑素（CST）含量。

【试剂盒组成】

1	酶标包被板	12孔×8条	7	显色剂A液	6mL
2	标准品：80pg/mL	0.6mL	8	显色剂B液	6mL
3	20倍浓缩洗涤液	25mL	9	终止液	6mL
4	标准品稀释液	6mL	10	说明书	1份
5	样本稀释液	6mL	11	封板膜	2张
6	酶标试剂	6mL	12	密封袋	1个

备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：80、40、20、10、5、2.5pg/mL

【需要而未提供的试剂和器材】

1、37℃恒温箱

2、标准规格酶标仪

3、精密移液器及一次性吸头

4、蒸馏水

5、一次性试管

6、吸水纸

【操作步骤】

1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。

2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。

3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、待测样本孔和空白对照孔，记录各孔位置，在标准品孔中加入标准品50μL；待测样本孔中先加入待测样本10μL，再加样本稀释液40μL（即样本稀释5倍）；空白对照孔不加。

4、温育：37℃水浴锅或恒温箱温育30min。

5、洗板：弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板4次（也可用洗板机按说明书操作洗板）。

6、加酶标工作液：每孔加入酶标工作液50μL，空白对照孔不加。

7、温育：重复4的操作。

8、洗板：重复5的操作。

9、显色：每孔先加入显色剂A 液50μL，再加入显色剂B液 50μL，37℃避光显色15min。

10、终止：取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（颜色由蓝色立转黄色）。

11、测定：以空白孔调零，在终止后15分钟内，用450nm波长测量各孔的吸光值（OD值）。

12、计算：根据标准品的浓度及对应的OD值，计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样本的OD值，在回归方程上计算出对应的样品浓度，也可以使用各种应用软件来计算。最终浓度为实际测定浓度乘以稀释倍数。

【样本要求】

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