酶联免疫测定的干扰物质

内源性物质Boscato等指出，大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，影响测定结果。主要的内源性干扰物质有以下几种。

（1）类风湿因子 人血清中的IGG型类风湿因子（RF）,可与ELISA系统中捕捉抗体与标记二抗的Fc的段直接结合，从而导致假阳性。制造商采用F(ab)2替代完整的鼠IgG是最好的办法。标本预先用热变性IgG(63℃、10min)的固相吸附剂处理，可以除去RF的干扰。将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效。

（2）补体 补体经典活化途径从CIq开始，在固相一抗和标记二抗的过程中，抗体分子发生变构，Fc的CIq分子结合位点暴露出来，则CIq可将二者连结起来，造成假阳性。用EDTA稀释标本，亦可用56℃下30Min灭活补体的方法。

为避免上述RF及补体的干扰，特别推荐禽类如鸡、安，鹌鹑等的卵黄抗体，即IgY.它不激活哺乳动物的补体，不结合抗体分子的Fc，不与RF结合，从而避免假阳性。IgY也不结合哺乳动物细胞的Fc受体，为免疫组化提供方便。

（3）嗜异性抗体 人类血清中含有可与鼠等啮类动物Igs结合的天然的嗜异性抗体，可将一抗和标记二抗连接在一起，造成假阳性。在标本稀释中加入过量动物的Igs有效然而亦可因加入的鼠Igs用量不足或者是亚类不同而失败。

（4）医源性诱导的抗鼠Igs抗体 临床上逐渐开展用鼠源性CD3等单抗治疗疾病、用放射性同位素标记鼠源性抗体的影像诊断及靶向治疗等新技术，这些患者可能产生抗鼠抗体，而造成假阳性。此外，被鼠等啮齿类动物咬伤后的患者体内，可有抗鼠Igs的抗体，这要靠了解病史。测定抗原时，在标本中加入足量的正常鼠Igs，可克服由此而产生的假阳性。

（5）抗靶抗原的自身抗体 抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等的自身抗体，均可干扰抗原或抗体的测定结果，需要同时作抗原与抗体测定，有时自身抗体与待测靶抗原形成复合物，测定之前需要用理化方法解离后再测定。

（6）交叉反应物质 与靶抗原有交叉反应的物质，如类地谷新、类aFP样物质等，原来大都用多抗来测定抗原，这少数交叉抗原决定簇对测定结果的影响不大。现在普遍用单抗测定，倘若这个决定簇正好是所用单抗对应的靶决定簇，结果是不难相像的，会出现假阳性或假阴性结果。

其他物质：内源性酶如碱性磷酸酶，过氧化物酶对二步夹心ELISA影响较少，主要干扰免疫组化的结果。而内源性酶和底物，抑制酶活性的药物等，对一步法ELISA干扰作用较明显。此外，血清黏度过大、血脂过高、胆红素、血红蛋白等也有干扰作用。应该特别指出的是，还有一些体内天然存在的物质，可与靶抗原互相结合而引起靶抗原变构，如已证实胆红素和2离脂肪酸可结合aFP分子而导致其分子变构，与aFP分子结合的单抗还有Ca依赖性的差别。这些因素都可能会干扰aFP的测定结果。所以，aFP定量、定性测定不但不同试剂盒之间定量测定值的可比性很差，而且同一试剂盒的室间、室内测定值的变化也较大。此外还经常发生假阳性与假阴性结果。

外源性物质 采集血清标本时，加入的抗凝剂，如肝素、EDTA以及快速分离血清的分离凝胶等，均有干扰作用。标本储存过程中的变化，如aFP可形成二聚体，影响定量测定。

测定试剂中含有酶抑制剂如Na3N,可抑制HRP活性。

除此之外，还有与操作人员的素质有关的实验误差，随机误差等问题。

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