H2S 含量测定试剂盒说明书
可见分光光度法 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
产品内容：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。试剂一：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存。试剂四：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
试剂五：液体 3mL×1 管，4℃避光保存。
产品说明：
H2S 是一种新型气态信号分子，存在于脑内的神经递质，生理浓度的 H2S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用，并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。
H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在
665nm 处有最大吸收峰，通过测定其吸光值可计算 H2S 含量。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计 1ml 玻璃比色皿、蒸馏水。
操作步骤：
一、样品处理：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（10 4 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议
500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7
秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清（浆）：直接测定。
二、测定步骤： （取 1.5ml 离心管，按照下表操作）
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空白管 |
测定管 |
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样品（μL） |
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250 |
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H2O（μL） |
250 |
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试剂一（μL） |
250 |
250 |
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充分震荡混匀 |
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试剂二（μL） |
250 |
250 |
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12000rpm，4℃，离心 10min，去上清，留沉淀 |
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H2O（μL） |
500 |
500 |
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12000rpm，4℃，离心 10min，去上清，留沉淀 |
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试剂一（μL） |
250 |
250 |
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试剂三（μL） |
250 |
250 |
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充分震荡混匀 |
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试剂四（μL） |
250 |
250 |
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12000rpm，4℃，离心 10min，取上清 |
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试剂五（μL） |
50 |
50 |
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混匀，25℃静置20min，于微量石英比色皿/96孔板中，空白管调零，测定665nm吸光值， 记为A665。 |
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三、H2S 含量计算公式：
标准曲线回归方程为：y = 0.0044x，R2 = 0.9988
（1）组织样品
a.按照蛋白浓度计算
H2S（μmol/mg prot）= A665÷0.0044×V 反总÷(V 样×Cpr)×10-3=0.727×A665÷Cpr
b.按照样本重量计算
H2S（μmol/g）= A665÷0.0044×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10
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