内参抗体种类与选择-分析方法-资讯-生物在线

内参抗体种类与选择

作者:北京正旦国际科技有限责任公司试剂部 2012-11-26T00:00 (访问量:10336)

内参即是内部参照(Internal Control),对于哺乳动物细胞表达来说一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在各组织和细胞中的表达水平相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。在Western Blotting中使用内参对应的抗体来检测内参,这样在检测目的产物的同时可以检测内参的表达,由于内参在各组织和细胞中 的表达相对恒定,借此,可检测每个样品内参的量继而可以用于校正上样误差,这样半定量的结果才更为可信。此外使用 内参可以作为空白对照,检测蛋白转膜情况是否完全、整个Western Blot显色或者发光体系是否正常。 常用的蛋白质内参有GAPDH (glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)和细胞骨架蛋白beta-actin或beta-tubulin。 His标签是由6个组氨酸(His-His-His-His-His-His)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白质的吸附纯化。由于分子量较小,并且 较容易分离和纯化,His融合标签与其他标签相比有很多明显优势,是目前用于纯化的融合标签中使用最为广泛的一种。利 用His标签可以建立一个基于融合蛋白的高效检测和纯化系统。His抗体可以用于检测和His标签融合表达蛋白的表达、细胞 内定位,以及纯化、定性或定量检测His融合表达蛋白等。 GST标签体系具有蛋白表达产率高、表达产物纯化方便,以及利于GST抗体制备等特点。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可 从细菌裂解液中提取,在不变性的条件下通过亲和层折得到。GST融合蛋白可被位点特异性蛋白酶裂解,从而除去GST蛋 白。 GFP标签可位于蛋白质的C端或N端,该系统已广泛应用于各种细胞类型,包括细菌、酵母和哺乳动物细胞等,相应的 GFP标签抗体也被广泛应用。 Myc标签(序列为:EQKLISEEDL)已成功应用于WB杂交技术、免疫沉淀IP和流式细胞术中。因此可用于检测重组蛋白在 细菌、酵母、昆虫细胞和哺乳细胞中的表达情况。
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